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Réinitialisation d'une colonne C18

Publié:2012-06-12Source: général
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Réinitialisation d'une colonne C18

La haute pression de chromatographie liquide (HPLC, pour faire court) est un outil pour séparer un mélange de produits chimiques. La séparation et l'identification de certains produits chimiques dans un mélange sont produites principalement dans la colonne de CLHP dans le système. De nombreux types de colonnes sont disponibles pour les systèmes HPLC et chaque type est destiné à un type spécifique d'analyse. La colonne C18 est le plus fort non polaire généralement utilisé. Après une utilisation continue pendant une période de temps, le taux d'écoulement du solvant à travers les diminutions de la colonne et le temps d'analyse pour analyse. Une autre cause d'un échantillon d'analyse de ralentissement ont laissé de petites quantités de produits chimiques dans la matière de la colonne et la réduction de la capacité de la colonne à produits chimiques distincts. La régénération de la surface de la colonne est effectuée par traitement de la matière d'emballage pour un ensemble spécifique de solvants pour nettoyer les échantillons restants de la colonne et revitaliser le matériau de support.

Niveau de difficulté:

Difficile

Vous avez besoin

HPLCFase Qualité qualité de l'eau la qualité de la qualité de l'HPLCIsopropanol HPLCMetanol HPLCHexano HPLCDiclorometano norme de qualité inversé

Instructions

1 Déconnecter la colonne C18 du flux d'écoulement et remplace la colonne dans la direction inverse. L'exécution du solvant à travers la colonne dans le sens opposé desserre l'effet de tassement qui se produit au fil du temps. Il faut prendre soin de ne pas perdre une grande quantité de matériau d'emballage à partir de l'extrémité de la colonne. Certains fabricants utilisent un maillage plus grand sur l'extrémité amont de la colonne, de sorte que lorsque la direction d'écoulement est inversée maille plus grande est dans la position en aval. Ce procédé de régénération est appelé rétrolavage. Pour se protéger contre le matériau d'emballage qui se jettent dans le système de détection et éventuellement provoquer un bouchon permet au système de fonctionner sans le détecteur connecté et diriger la sortie de la colonne à perdre.

2 Placer le tube d'entrée de solvant dans une série de solvants pour provoquer l'élution des composés retenus dans la colonne dans la direction inverse. Le nombre de solvants utilisés varient dans leurs caractéristiques hydrophiles. En faisant varier les solvants sont hydrophiles dans les composés de la nature varie également. Utilisez 50 ml de chacun des solvants suivants successivement: l'eau (si vous utilisez un tampon dans votre solvant), le méthanol, l'isopropanol, le dichlorométhane, l'hexane, le dichlorométhane et l'isopropanol.

3 reconnecter la colonne vertébrale dans l'orientation correcte et le solvant traverse le système. Utilisez au moins 75 ml de solvant pour laver la colonne avant de poursuivre. Exécute une injection de test d'une norme que vous avez exécuté lorsque la colonne était nouveau et vérifie les résultats. Portez une attention particulière aux temps de rétention maximum, queues de pointe et le temps total d'analyse. La mesure dans laquelle ces attributs correspondent à la course initiale de la colonne quand il était neuf indiquer la mesure dans laquelle la colonne a été régénérée. Si les résultats ne sont pas satisfaisants, remplacer la colonne avec la nouvelle et l'ancienne colonne se détache.

[Rédacteur: Admin]
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