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Pourquoi le chlorure de magnésium est utilisé dans la PCR?

Publié:2014-07-27Source: général
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Pourquoi le chlorure de magnésium est utilisé dans la PCR?

Quand un enquêteur de la scène du crime ou un médecin a obtenu un échantillon d'ADN, souvent il n'y a pas suffisamment d'ADN disponibles pour analyser correctement, il. Afin de simuler le processus de replication de l'ADN dans le corps lui-même, les scientifiques ont développé un procédé appelé réaction de polymérisation en chaîne (PCR), qui peut agir comme une machine Xerox à copier après copie d'un échantillon d'ADN. Il existe de nombreux composants dans une réaction de PCR, et le chlorure de magnésium est l'un des plus vital.

Imiter le corps

La réaction en chaîne par polymerase (PCR) a été mis au point pour imiter la forme réelle de la réplication de l'ADN dans la nature. L'ADN est une séquence de répétition de nucléotides, chaque nucléotide comporte trois parties. L'épine dorsale de l'ADN est une unité de sucre et de phosphate répétitions, chaque sucre a une base azotée attaché à elle. Il existe quatre bases, la guanine, la cytosine, l'adénine et la thymine. ADN consiste en deux chaînes de phosphate de sucre et parallèlement les uns aux autres avec deux bases azotées de liaison entre deux sucres. Lorsque l'ADN est répliqué dans l'organisme, une enzyme appelée hélicase rompt les liaisons entre les bases azotées. Une seconde enzyme, l'ADN polymérase, donne de nouveaux nucléotides à la place de l'ancien. Enfin, une troisième enzyme appelée ADN ligase unit les nouvelles molécules.

Les composants de réaction pour la PCR

Quelques modifications doivent être apportées afin de répliquer l'ADN dans une réaction de laboratoire. Au lieu de hélicase, une réaction PCR utilise simplement la chaleur pour briser les liaisons entre les nucléobases. ADN polymérase humaine est pas suffisamment stable pour résister à cette température. Une molécule similaire appelée Taq polymérase ou polymérase, est utilisé à la place car il peut supporter les besoins en chaleur de PCR. En outre, une réaction de PCR nécessite nucléotides libres, le tampon et le magnésium.

Le rôle du chlorure de magnésium

Le chlorure de magnésium est l'addition de magnésium préféré, un procédé de PCR expérience. La polymerase thermostable nécessite la présence de magnésium d'agir comme un cofacteur pour le processus de réaction. Sa fonction est similaire à un catalyseur, en ce sens qu'aucune magnésium est consommé dans la réaction, mais la réaction ne peut pas avoir lieu qu'en présence de magnésium.

Effets de magnésium dans l'abondance

Plus magnésium est ajouté à une réaction de PCR, plus la réaction se poursuivre. Cependant, ce ne est pas nécessairement une bonne chose. Si trop de magnésium est présent, l'ADN polymérase sera courir très vite et ont plus d'erreurs dans le processus de réplication. Cela se traduira par différents brins d'ADN qui ne représentent pas nécessairement ce qui a donné l'échantillon initial.

Effets de l'utilisation de magnésium bas

Si magnésium est utilisé en quantités limitées dans une réaction ne procédera pas aussi vite qu'il le devrait. Vous pouvez essayer de lancer un cycle de PCR 40, mais n'a pas obtenu le nombre de copies que vous souhaitiez. Chaque cycle PCR double la quantité d'ADN dans le tube à essai de façon exponentielle. Ainsi, alors que vous commencez avec une petite quantité, vous vous retrouvez avec beaucoup de fois le montant initial. Sans suffisamment de magnésium, une partie de l'ADN polymérase est pas activé et ne fonctionnera pas. Cependant, la chaleur sera supprimé et l'ADN est présent et ne se joindra pas. Par conséquent, l'expérience peut être ruinée si il n'y a pas suffisamment de magnésium présente.

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[Rédacteur: Admin]
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