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Des procédés de fractionnement cellulaire

Publié:2012-08-05Source: général
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Des procédés de fractionnement cellulaire

Les biologistes ont souvent besoin de purifier des composants spécifiques de cellules ou de protéines à partir d'échantillons de tissus dans le cadre d'une expérience. Le processus par lequel les cellules se séparent de leurs composants cellulaires est appelé fractionnement. Il ya plusieurs étapes à ce processus.

Homogénéisation

D'abord, les cellules doivent être rompues pour ouvrir. Une variété de procédés différents; Le choix dépend du type d'expérience et le type d'échantillon (culture bactérienne ou un échantillon de tissu de mammifère, par exemple). Les détergents tels que le SDS ou le Triton X modifient membrane de la cellule de sorte que les contenus peuvent couler. Soumettre les cellules à une sonication ou des ondes ultrasonores également briser, comme une agitation en présence de billes de métal ou de verre. Mélangeurs peuvent travailler avec des échantillons de tissus, mais ne fonctionnera pas avec des bactéries ou autres micro-organismes.

Filtration

Les cellules sont homogénéisées toujours dans une solution tamponnée qui permet de stabiliser le pH et évite d'endommager le contenu des cellules lors de l'extraction par conséquent. Occasionnellement, l'homogénat résultant doit être filtré pour éliminer le tissu conjonctif ou d'autres éléments indésirables. En fonction de la nature du contaminant, ce peut être aussi simple que de verser l'homogénat à travers une étamine et recueillir le filtrat dans de l'autre côté. En tout temps après homogénéisation, le broyat doit être conservé au froid pour minimiser l'activité de la protéase, les enzymes protéiques ruine. Certains inhibiteurs de la protéase sont également ajoutés.

Centrifugation

Ensuite, l'homogénat a été transféré dans un tube de centrifugation et placé dans une centrifugeuse. Ce dispositif contient un rotor tourne à grande vitesse et en agitant le contenu de chacun des tubes sur, de la même manière que la conduite à gauche autour d'un virage serré que vous jette dans la porte sur le côté passager. Intensifie les composants de densité avant culot homogénéisé et inférieure à la densité des composants, de sorte qu'ils puissent être séparés et recueillis basées sur la densité de la vitesse.

Du sulfate d'ammonium précipitation

Parfois, les biologistes ont besoin de recueillir des organites spécifiques de homogénéisé pour étude approfondie. Dans l'affirmative, la centrifugation répétée est utilisé pour isoler la fraction contenant l'organite qui ont besoin. Si, d'autre part, sont essayer d'isoler une protéine spécifique, on peut utiliser une technique appelée précipitation avec du sulfate d'ammonium. L'ajout de sel d'ammonium qui augmente la force ionique de la solution de sulfate, il est certaines protéines précipitent centrifugation. Ce procédé réduit la concentration de protéines dans l'homogénat et faciliter la purification de la protéine d'intérêt par la suite.

[Rédacteur: Admin]
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