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Comprendre les résultats de cytométrie en flux

Publié:2012-02-21Source: général
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Comprendre les résultats de cytométrie en flux

Les scientifiques utilisent cytométrie de flux pour distinguer différents types de cellules ou d'organismes microscopiques. Il est un outil qui est utilisé dans de nombreuses applications telles que le diagnostic médical ou de la médecine légale. Bien que cette technique expérimentale est assez facile à réaliser, l'analyse de données complexes produites par le cytomètre en flux est plus difficile en raison de la multiplicité des facteurs et / ou des paramètres du cytomètre expérimentales. En tant que tel, il est courant pour les données de cytométrie à être affichées et analysées à l'aide des programmes sophistiqués ou professionnels que CELLQuest FlowJo. Familiarité avec les techniques de la cytométrie de flux, des machines et des logiciels est nécessaire pour comprendre les résultats produits par ces expériences.

Niveau de difficulté:

Modérément difficile

Vous avez besoin

FlowJo logiciels ou d'autres données d'analyse de cytométrie flujoDatos flujoProtocolos expérimentales premières Cytomètres cytométrie en flux et les paramètres de la machine

Instructions

La compréhension de la cytométrie de flux de données

1 clarifie le but de l'expérience en demandant: «Quelle était la question ou l'hypothèse d'une enquête?". Cela est nécessaire pour ajuster les résultats à la configuration du format et des cousins ​​appropriée pour l'analyse en outre l'utilisation de la cytométrie de logiciels statistiques. Apporter les changements nécessaires afin d'avoir les données affichées avec les ajustements appropriés (par exemple des cellules positives, négatives, portails intensité de fluorescence, des populations de cellules, etc.).

2 Trouver les portails. Les cellules peuvent être groupés ou regroupés densité simplement observé ou diagramme de contour. Les groupes sont souvent séparés en fonction de leur identité. Si des taches intenses d'un marqueur ou d'un anticorps particulier sont réunies, il conclut que les membres de ce groupe ont l'identité du type de cellule spécifique, qui exprime que marqueur. Il est fréquent de trouver des cellules positives sur un de ces marqueurs, et ces cellules sont généralement un produit intermédiaire et est notée «double-positive».

3 Regardez les diagrammes de dispersion. La façon dont les groupes de cellules sont réparties dans un nuage de points indique la taille des cellules. Les cellules avec une dispersion très large ou élevé sont généralement grandes cellules; cependant, ils peuvent être très simplement parce qu'ils contiennent une forte proportion de cytoplasme, ou peuvent être élevés parce qu'ils ont un gros noyau. Selon une enquête sur la biologie, bien sûr, cela varie considérablement entre les expériences.

4 Regardez les chiffres. Réglez cadres pour afficher différents paramètres sur un axe (généralement l'axe X), tout en maintenant les chiffres sur l'axe Y Cela indique la proportion de l'échantillon positif de la population pour ce paramètre particulier, parce que normalement un maximum sera vu dans un colorées positivement échantillon, qui est absent dans l'échantillon de contrôle négatif.

5 Voir multiples histogrammes de paramètres. Réglage de l'axe X et l'axe Y pour chaque paramètre différent a été étudiée lors de l'expérience et il est possible d'obtenir une meilleure compréhension des propriétés de l'échantillon est montré. Par exemple, la mise de l'axe X pour la fluorescence rouge et l'axe Y pour la fluorescence verte, portails de style quadrant peuvent être calculées pour l'échantillon à afficher quatre régions d'un quadrant dans lequel les cellules sont présentes et colorées pour fluorescence rouge ou vert, deux couleurs, ou pas du tout. Cela permet à un échantillon hétérogène est divisé en ses composantes et les caractéristiques se chevauchent sont affichés et quantifié.

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[Rédacteur: Admin]
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