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Comment calculer la concentration d'ARN

Publié:2012-07-22Source: général
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Comment calculer la concentration d'ARN

Votre échantillon d'ARN quantifiée en mesurant l'absorbance de la lumière ultraviolette (UV). Un spectrophotomètre nano-drop utilisé seulement un ou deux microlitres de l'échantillon, qui peut récupérer. Autres spectrophotomètres exigent un échantillon beaucoup plus large. Le coefficient de nucleotides dans une longueur d'onde UV de 260 nm d'extinction dans un trajet lumineux de 1 cm est de 20. Sur la base de ce coefficient d'extinction, l'absorbance de 40 pg / ml d'ARN dans les mêmes conditions est une . Avec cette information, vous pouvez calculer la concentration de l'échantillon d'ARN.

Niveau de difficulté:

Modéré

Vous avez besoin

EspectrofotómetroCalculadora

Instructions

1 dilue l'échantillon, si nécessaire. Une dilution standard pour une microcuvette est de 1:40. Pour ce faire, en ajoutant 2 ul dilution des échantillons ARN 78μL d'eau stérile.

Suivre les deux protocoles sur le spectrophotomètre particulier pour calibrer l'appareil en utilisant un vide et ensuite déterminer la densité optique de l'échantillon à une longueur d'onde UV de 260 nm.

3 multiplie l'absorbance de l'échantillon par l'ARN de facteur de dilution de 40 pg / ml. L'équation serait: "concentration d'ARN (mg / ml) = (OD 260) x (facteur de dilution) x (40 ug d'ARN / ml) / (1 unité OD 260)" (Hofstra.edu) Par exemple: Si diluyes l'échantillon 01:40 et votre lecture de l'absorbance était de 0,08, aurait à se multiplier 0,08 x 40 x 40 = 128 pg / ml = 0,13 ug / ul

4 calcule la pureté de l'échantillon prenant une autre lecture de l'absorbance à 280 nm de longueur d'onde UV. Le ratio DO 260 / DO 280 indiquer si et à quel niveau, l'échantillon est contaminé par des protéines ou des phénols. Un score de 1,8 à 2,0 indique la qualité de l'ARN.

Conseils et avertissements

Ne pas oublier de calibrer le spectrophotomètre.

Courir électrophorèse sur gel rapide a confirmé les résultats de vos spécifications.

Ne présumez pas que votre échantillon est pur. Prenez le temps pour une relation DO 260 / DO 280 permet d'économiser temps et argent.

Lire cet article en Inglés: Comment calculer l'ARN Concentration

[Rédacteur: Admin]
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